2.1.2.1 氨基酸分类与必需性
文档摘要
2.1.2.1 氨基酸分类与必需性 你有没有遇到过这样的场景： 在体外重组表达一个人源转录因子时，蛋白纯化得非常漂亮——SDS-PAGE上单一条带、浓度高达8 mg/mL、SEC显示均一单峰……可下游的EMSA实验却死活不出条带，荧光偏振测结合常数K d 直接飘到>100 μM，而文献报道应为200 nM；更诡异的是，同样这批蛋白，用不同批次的商业缓冲液重溶后，活性忽高忽低，甚至同一批缓冲液分装后隔周复测，活性衰减超过70%？ 我们花了三周排查质粒突变、宿主菌株、诱导温度、裂解强度、柱料再生、内毒素污染……最后发现，问题出在——L-半胱氨酸被氧化成了胱氨酸，而该转录因子DNA结合域含一对关键的Cys 234 –Cys 251 二硫键，其正确折叠严格依赖还原性微环境；
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