1.1.1.2 CRISPR位点的结构特征（重复序列与间隔序列）

文档摘要

1.1.1.2 CRISPR位点的结构特征（重复序列与间隔序列） 1.1.1.2 CRISPR位点的结构特征（重复序列与间隔序列） ——一个被低估的“序列语法错误”如何让整个CRISPR-Cas系统在体外组装中静默失效你有没有试过：设计好一条完美的sgRNA，转染进HEK293T细胞，Western blot显示Cas9蛋白表达量充足，qPCR确认靶基因mRNA显著下调——可偏偏Sanger测序结果里，目标位点的编辑峰图干净得像没动过刀？或者更糟：在大肠杆菌中构建pET-28a-Cas9质粒时，明明插入了含3个spacer的CRISPR array，诱导表达后却只检测到Cas9单体，而crRNA完全不可见？这不是脱靶，不是转染效率低，也不是gRNA二级结构捣鬼。