1.1.2.1 关键里程碑：从Streptococcus pyogenes到基因剪刀

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1.1.2.1 关键里程碑：从Streptococcus pyogenes到基因剪刀 1.1.2.1 关键里程碑：从Streptococcus pyogenes到基因剪刀 ——一个工程师在CRISPR-Cas9 sgRNA二级结构预测失败现场的37小时复盘凌晨2:17，PCR仪刚结束最后一轮扩增，离心机还在嗡鸣，我盯着电泳胶上那条模糊的、比预期条带略高的DNA条带，手指悬在移液枪上方三毫米处，迟迟没有按下。这不是第一次——但这次不同。我们设计的sgRNA靶向人类TP53第7外显子一个保守位点（chr17:7,674,201–7,674,220，GRCh38），理论上切割效率应＞85%，可流式分选后测序显示：仅12.3%的细胞发生INDEL；而阴性对照组（非靶向sgRNA）竟有4.