2.1.1.2 PAM交互结构域（PI）的特异性识别

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2.1.1.2 PAM交互结构域（PI）的特异性识别 2.1.1.2 PAM交互结构域（PI）的特异性识别：当SpCas9在人类基因组中“认错门牌号”之后，我们如何用单氨基酸突变把它拉回正轨？你有没有试过，在设计一个gRNA时，反复检查靶点上游是否含有NGG——那个被教科书反复强调、被CRISPR工具网站自动高亮、被实验室新人抄在实验记录本首页的PAM序列？你信心满满地合成gRNA，转染细胞，做T7E1，跑胶，却只看到一条干净的条带；再测序，发现编辑效率低于0.5%；而隔壁组用同样长度、同样GC含量、甚至更差二级结构的gRNA，编辑率却高达32%。你盯着序列比对图发呆：靶点完全匹配，脱靶预测分数极低，载体没问题，Cas9表达量正常……问题出在哪？不是gRNA错了。