2.1.2.2 第二大类（Class 2）：单蛋白效应器（Cas9, Cas12, Cas13）

文档摘要

2.1.2.2 第二大类（Class 2）：单蛋白效应器（Cas9, Cas12, Cas13）当Cas12a的脱靶峰在qPCR曲线上突然“诈尸”：一个关于crRNA二级结构稳定性与Tm值错配的实战排障手记凌晨两点十七分，实验室的超净台还亮着幽蓝的LED灯。我盯着实时荧光定量PCR仪屏幕上那条不该存在的、微微上扬的扩增曲线——它不属于阳性对照，也不属于阴性对照，却固执地出现在第32个循环之后，像一缕不肯散去的幽魂。样本是刚转染完LbCas12a和一对靶向VEGFA基因的crRNA的HEK293T细胞，检测引物特异性经过三轮BLAST验证，DNA提取无RNA污染，NTC（无模板对照）干净得如同初雪。可这条曲线偏偏在那里，不声不响，却足以让整块96孔板的编辑效率数据集体失重。这不是第一次。