4.1.2 嵌套PCR与磁珠富集技术

文档摘要

4.1.2 嵌套PCR与磁珠富集技术在高通量测序（NGS）的随机访问技术谱系中，4.1.2节所指的“嵌套PCR与磁珠富集技术”绝非两种孤立方法的简单并列——它是一套经过精密时序编排、热力学参数耦合、分子行为建模驱动的双阶段靶向富集闭环系统。当我们在单细胞多组学、微量cfDNA检测或痕量病原体筛查中面对 A）时，内引物的3′端最后一个碱基，必须精确对应第1799位；若此处为T，则延伸高效；若为A，则因3′端错配导致Klenow片段校对活性触发，延伸速率下降两个数量级（实测t₁/₂从8.3 s延长至127 s）。这已不是传统意义上的“特异性提升”，而是一种基于聚合酶校对动力学的分子逻辑门。