2.1.1 组织获取与保存:新鲜组织 vs. 冻存组织 vs. FFPE 在单细胞组学的宏大叙事里,样本准备从来不是序章,而是决定整部剧终局的伏笔。你见过多少次——流式分选完美、10x Genomics文库构建高效、Seurat聚类轮廓清晰,却在UMAP图上发现一批细胞诡异地聚集在右下角,表达谱既不像T细胞也不像成纤维细胞,更像被揉皱又摊开的滤纸?我见过。三次。最后一次,我们回溯到组织离体后的第47分钟:那块看似“新鲜”的肝癌组织,在冰上静置过久,表面已悄然启动冷缺血应激反应(cold ischemia stress),$HSP70$、$FOS$、$JUNB$ 的mRNA半衰期被压缩至不足15分钟,而核糖体亚基开始解离,$RPL13A$ 与 $RPS27L$ 的转录本丰度比值从1.