2.1.3.2 基因组大规模重排与多位点编辑

文档摘要

2.1.3.2 基因组大规模重排与多位点编辑当CRISPR遇上染色体拓扑：一位基因组工程师在酵母中踩过的七个坑，以及那个让多位点重排成功率从12%跃升至83%的“锚定-释放”递送策略你有没有试过，在同一个酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）细胞里，同时敲除ADE2、URA3、HIS3三个非必需基因，再把一段14.7 kb的人源抗体轻链可变区（VL）序列精准插入HO位点，最后还要求这四重编辑事件在单次转化后共发生——且不依赖筛选标记、不引入随机缺失、不触发染色体断裂级联反应？这不是考试题。这是上周三凌晨三点，我盯着电泳胶上那条模糊却真实的14.7 kb插入条带时，手机里弹出的客户邮件正文。